להיות עם קומוני סכיזופילום: צור תרבות סטרילית מפטריות שנמצאו: 3 שלבים (עם תמונות)

2024 מְחַבֵּר: John Day | [email protected]. שונה לאחרונה: 2024-01-30 09:17

מדריך זה מתמקד בהסבר כיצד ליצור תרבות סטרילית של קומפונת Schizophyllum פטריות (שם נפוץ פטריית זיפים) על מנת פטרי באמצעות פטריות שנמצאו. נמצא שבקומונה סכיזופילום יש יותר מ -28,000 מינים, ניתן למצוא אותם בכל היבשות למעט אנטארקטיקה, ויש לה את היכולת (כמו "פטריות ריקבון לבנות וחומות אחרות" לפגום בזיהום המפריע לאנדוקרינים (פלסטיק, הורמונים המחקים פטרוכימיה תעשייתית כמו הדשן Atrazine, המרכך Bisphenol-A, או ההורמון הסינתטי Diethylstilbestrol).

אעבור על טכניקות זיהוי פטריות בר, כיצד להכין צלחת פטרי אגר מזין, וכיצד להשתמש בפטריות שנמצאו כדי לגדל תרבות מבודדת סטרילית בצלחת הפטרי שלך. מדריכים אחרים בסדרה זו עוסקים בטכניקות כגון זיהוי גנטי של פטריות, מבחני אנזימטיות פשוטים לבדיקת יכולתה של הפטרייה להתפרק מפלסטיק וזיהום מחקה הורמונים וכיצד להכין גבינה עם S. Commune.

פרויקט זה יצא מהעבודה השיתופית של מרי מאגיץ ', פולה פין, ואני במהלך שהות ב- HANGAR בברצלונה ספרד בסתיו ספטמבר 2018. למידע נוסף אודות הפרויקט קרא על ~~ או דלג על כל הבלא בל ועבור ישר לשלב 1 להדרכה:)

תמונות הן מקבצי Schizophyllum Commune Fanzine ~ ניתן להוריד בחינם כאן

במהלך השהות שלוש המטרות העיקריות שלנו היו:

1 ~ חקר ועיכול הספרות המדעית על קומוני סכיזופילום והיא אינטראקציות שונות עם הורמונים ומזהמים פטרוכימיים המפריעים לאנדוקרינים. S. Commune היא אחת מני רבות מפטריות "ריקבון לבן וחום" בעלות היכולת לפרק זיהום הורמונלי ומפריע לאנדוקרינית. פטריות אלו ניזונות מעצים על ידי הפרשת אנזימים "ליגנוצלולוזיס" מגופם המחובר לרשת או מ"מיציליה "והאנזימים מסוגלים לפרק את התאית והליגנין שממנו עשויים עצים. בגלל קווי הדמיון המבניים בין תאית, ליגנין והורמונים EDS / הורמונים כמו Atrazine, BPA, Estradiol, Diethylstilbestrol ו- Nonylphenols, האנזימים ה"ליגנוצלולוזיס "המופרשים מהפטריות יכולים גם לפרק מגוון רחב של חומרים רעילים. בנוסף לכך, S. Commune מייצרת פוליסכרידים חיסוניים המסייעים כמניעה וטיפול בסרטן (מאושרים ביפן לטיפול בסרטן צוואר הרחם), יכולים לשפר את התכונות הפיטו -אסטרוגניות של צמחים מסוימים באמצעות תסיסה, ניתן להשתמש בהם במקום רמפה ולקטובציליוס תהליכי ייצור גבינה, ומייצרים אנזימים הממיסים קריש תרומבין (שימושי בטיפול בפקקת). באופן מוזר, אותם "בטא-גלוקנים" הניתנים לחילוץ במים רותחים כטיפולים בסרטן ומרכיבי חיסון, משמשים גם את תעשיית הנפט לשיפור תפוקות הנפט, ומקשרים את S. Commune בלולאת משוב ביזאר לייצור הפרעות אנדוקריניות. פטרוכימיה הוא מסוגל להידרדר ולתקן.

2 ~ פיתחו פרוטוקולי DIY ו- DIWO (עשו זאת עם אחרים) המפשטים את הקבלות הללו לעבודה עם EDC ופטריות לתרגם ידע מדעי מקודד לשפה נגישה יותר. השתמש בקבלות אלה לחינוך, לחקירה, להתנגדות למושבות מולקולריות, וליצירת נרטיבים חדשים על הישגים רב -מינים ועל המוטגנזה הקולקטיבית שלנו.

3 ~ אתגר את השיח הדגול הדומיננטי, הקווירפובי, סביב כימיקלים המפריעים לאנדוקרינים (EDC). אם לצטט את המלגה של מאלין אה-קינג ואווה הייוורד בנושאים, "כלי חדשות רבים מדווחים על סיפורי האנדוקרינה המפחידים האלה בחצר האחורית שלנו. במאמץ להקדים את הנושאים האלה-כפי שנתאר בתקשורת הבאה, הדליקו מטמורפוזה של פרנקנשטיין המאיים על מין ומיניות. במקום להתייחס לסיכונים הבריאותיים הרבים האחרים הקשורים לחשיפה רעילה, הנושאים הסנסציוניים והפולימיים ביותר עומדים לדיון ותגובה ביקורתית. הוא מעורר שאלות: מדוע סקס מרכזי יותר מסרטן, מחלות אוטואימוניות, ואפילו מוות? אילו עצבים תרבותיים (שרבים מהם הם גלובליזציה), מופעלים? וגם לאלו מאיתנו עם חששות פמיניסטיים, כיצד ניתן לכוון מחדש את הדיון הרחק מאיסציאליזם, סקסיזם והטרו -נורמטיביות? " (מיני רעילים).

סכיזופילום קומונה היא "פטריית ריקבון לבנה" ייחודית בכך שנמצא כי יש לה יותר מ -28,000 מינים גנטיים. הסתגלות זו, רבים בתיאוריה, אפשרה את המגוון הגנטי המדהים של מין זה הקיים בכל יבשת ברחבי העולם למעט אנטארקטיקה. רצינו לחגוג את הריבוי המיני היפהפה של האורגניזם הזה כדוגמא אחת לנכונות הביולוגיה. השיח הדומיננטי סביב EDC בתקשורת, ואפילו מפעילים סביבתיים מתמקד רבות בנרטיבים לא מדעיים, שמולקולות אלו גורמות למיניות או מגדרים מסוימים שהחברה שלנו פתולוגית, מתייגת לא נורמטיבית, ולעתים קרובות מבקשת לחסל או להימנע ממנה. לא רק שהמוקד הפובי הפאני והמוזר של הזעקות הציבוריות על העניין שאינו מציאותי מבחינה מדעית (הורמונים ומפריעים אנדוקריניים אינם גורמים לאנשים להיות מוזרים או טרנסים), אלא שהוא מתעלם מכל ההשפעות האמיתיות ההרסניות שאנו יכולים לקשר ל- EDC: השמנת יתר, הפרעות בבלוטת התריס, סוגי סרטן מסוימים, בין שאר הסיכונים הבריאותיים.

שלב 1: מצא קומוני סכיזופילום החיים בקהילה שלך

ניתן לרכוש תרבויות סטריליות בדרגת מעבדה של קומת הסכיזופילים בסכום של כ -350 דולר מבנק תרבות מיקרוביולוגי כגון ATCC … ולכן בחרנו לתרבות מפטריות בר בחינם:)

היה לי קל כי קראתי על קומוני סכיזופילום ורק במקרה שמתי לב שהוא צומח על עץ מול הדירה שלי יום אחד. אם לא התמזל מזלכם במקרה שנתקלתם ב- S. Commune בשכונה שלכם, תרצו ללכת לאזור מיוער לחפש פטריות "סוגר" הגדלות על עצי פרקט חולניים (עצים שנראים כאילו אינם עושים זאת טוב מדי) או עצים שנפלו. S. Commune היא אחת הפטריות הקיימות הנפוצות ביותר בעולם וניתן למצוא אותה בעצם בכל מקום שיש עליו לגדל.

Mushroomobserver.org מספק תיאור מפורט נהדר של היכן ומתי אתה צפוי למצוא את S. Commune, כמו גם כיצד לזהות אותו וכיצד להימנע מ"הסתכלות דומה "שעלולה להוביל לזיהוי שגוי:

"זיהוי: קומונה סכיזופילומית מזוהה בקלות על ידי זימים מפוצלים, שיער צפוף ומכסה בצורת מניפה. הכובע ברוחב 1-4.5 ס"מ ובדרך כלל צורת קליפה או מאוורר עם משטח אפור עד לבנבן. Basidiospores הם 5-7.5 × 2 -3 מיקרומטר. פטרייה דומה הידועה בשם "crimed Gill" cricpa Plicaturopsis אינה מופצת באופן נרחב.

HABITAT: קומונית סכיזופילום צומחת על עץ בעזרת אנזימים לפירוק ליגנין וגורמת ל"ריקבון לבן ". אז הוא נמצא ברוב אזורי העץ. ניתן למצוא אותו כל השנה בשל יכולתו להתייבש, להתייבש מחדש בתנאים טובים יותר ולאחר מכן להמשיך להתרחש.

פטרייה זו עלולה להיות טפילית על עצים בקוטר קטן הנמצאים בלחץ מגורמים אחרים, כגון בצורת.

חפש דומים: Plicaturopsis crispa או "הזינוק המקומט" דומה לזיג המפוצל. יש לו גם גוף פרי בצורת קליפה/מניפה. עם זאת הכובע חום אדמדם או צהוב, והחלק התחתון ייחודי מאוד. יש לו וריד מקומט כמו זימים השונים בהרבה מהזימים המפוצלים של קומונה סכיזופילום. הזינוק המקומט פחות נפוץ אך ייחודי כאשר הוא נמצא."

שלב 2: הכינו צלחות אגר תזונתיות כדי ש- S. Commune תצמח

כדי לבודד תרבות של ה- S. Commune תמצא שתזדקק לכמה מנות פטרי מלאות בפטריות. תמצית מאלט אגר הוא מזון פשוט להכנה עבור S. Commune, או "חומרי הזנה" שניתן להכין עם מרכיבים נגישים. זהו גם מקור מזון טוב לשימוש בעת ביצוע ניסויי בדיקה אנזימטיים עם S. Commune ופטריות ריקבון לבנות או חומות אחרות ~ ~ תהליך זה יכוסה בעוד הוראה.

הערה צדדית: אם התקשת למצוא S. S. Commune, ישנם פטריות רבות אחרות באותה משפחה שניתן לגדל אותן באמצעות אותם תהליכים והן טובות לא פחות אם לא טובות יותר בפגיעה במזהמים המפריעים לאנדוקרינים. זנב טורקיה (Trametes Versicolor) נמצא במחקרים רבים שבחנו מאות פטריות ריקבון לבנות וחומות כמפיקות הגבוהות ביותר של האנזימים ה"ליגנוצלולוזיס "המשפילים את הזיהום הפטרוכימי. גם פטריות צדפות טובות בזה.

אני עושה את העבודה המיקרוביולוגית שלי במעבדת ביולוגיה קהילתית בשם BUGSS (Baltimore Underground Space Space) שבה יש לי גישה לכלי זכוכית, מאזנים דיגיטליים, צילינדרים מתקדמים, אוטוקלאב (לעיקור חום ולחץ של התקשורת) וכו '. צמח ברחבי העולם בעשור האחרון, לכן כדאי לבדוק ברשימה זו כדי לראות אם יש אחת בקרבתך. אם אין לך מעבדה קהילתית מצוינת בסביבתך, יהיה עליך להשקיע בכמה ציוד בסיסי לתהליך זה כגון:

1 ~ סולם דיגיטלי למדידת החומרים שלך במדויק

2 ~ סיר לחץ לעיקור המדיה שלך בחום ובקיטור

3 ~ מנות פטרי, ניתן לרכוש באינטרנט די בזול, זכוכית רב פעמית או פלסטיק חד פעמי יעבדו אך לשימוש חוזר תמיד עדיף:)

4 ~ כמה כלי זכוכית לערבוב החומרים שלך, לעיקור ולאחסון.

אם אינך רוצה להשקיע בציוד זה תוכל למצוא צלחות אגר בתמצית מאלט שנמזגות מראש לרכישה באתרים כמו אמזון ~ זה יהיה פשוט יקר יותר בטווח הארוך אם אתה מתכנן להמשיך ולעשות עבודה מיקרוביולוגית.

יש כבר הרבה מדריכים וסרטוני יוטיוב נהדרים כיצד להכין מנות פטרי מזין בעצמך בבית. אז במקום לפרט על זה, אני רק אקשר לזוג - ואספק את המתכון לאגר תמצית מאלט 2%, שהוא אמצעי המזין בו תשתמשו.

פטריות Freshcap: מדריך כיצד להכין צלחות אגר לגידול פטריות בבית

מיקוב: תחילת העבודה עם גידול פטריות

גיליון נתונים טכניים של תמצית מאלט

2% אגר תמצית מאלט (MEA) ~~ מתכון לליטר אחד:

תמצית מאלט 20 גרם (אספקה נפוצה להכנת בירה, ניתן לרכוש באינטרנט)

15 גרם אגר (חומר מגבש - זה משמש לבישול עם לעתים קרובות, כך שניתן לרכוש אותו באינטרנט או בכמה חנויות מכולת)

1 ליטר H20 (בדרך כלל אני משתמש במי אוסמוזה הפוכה שניתן לרכוש ברוב חנויות המכולת בכדיים גלון)

ניתן לשנות מתכון זה בקלות אם רוצים להכין כמויות קטנות יותר. לעתים קרובות אני מכין רק 250 מ"ל בכל פעם למשל, כך שבסופו של דבר אני משתמש רק ב -5 גרם תמצית מאלט, 3.75 גרם אגר ו -250 מ"ל מים.

שלב 3: חסן את מנת הפטרי שלך עם פטריות

הפטרייה שאתה רואה נקראת "גוף הפרי", היא רק חלק קטן מהאורגניזם. רוב גופו מוסתר בעץ (או באדמה), צורך את העץ. חלק זה של הפטרייה נקרא תפטיר. לתרבות גוף הנימה הלבן, הזרוע, הזרוע, התזותי, של Schizophyllum Commune על מנת צלחת פטרי, תיקח דגימה מהגבעול, תעקר ותניח על צלחות ה- MEA שלך. התפטיר יגדל מדגימת ליבת הפטריות המעוקרות ויתיישב את צלחת הפטרי, ונראה כמו מחצלת כותנה לבנה.

אתה תצטרך:

• צלחות תמצית מאלט (MEA) שהכנתם בשלב הקודם
• 70% אלכוהול איזופרופיל (אלכוהול שפשוף) ובקבוק ריסוס
• מגבות נייר
• אזמל, או סתם סכין גילוח מנירוסטה יעבוד
• פינצטה ממתכת
• כפפות
• להבה - אני משתמש במנורת אלכוהול לעיקור מכשירים, ל- NonDisjunction יש הדרכה מצוינת כיצד להכין אחד כאן.
• משטח סטרילי לחיתוך (בדיוק השתמשתי בצלחת פטרי סטרילית לשם כך)
• Parafilm, סרט פרפין המשמש לאטום מנות פטרי - אתה יכול גם פשוט להשתמש במסקינג טייפ אם אין לך את זה

טכנולוגיה סטרילית:

הדבר העיקרי שאתה רוצה לזכור כאשר אתה מנסה להשתמש בטכניקה סטרילית הוא שחיידקים ונבגים נופלים באוויר ללא הרף, כך שאתה רוצה לשמור על מנות הפטרי שלך מכוסות כמה שיותר. כאשר אתה מרים את המכסים כדי לשפוך מדיה או לחסן, תמיד עדיף להחזיק את המכסה ממש מעל המנה, מה שמאפשר לך לגשת לפנים בצורה אופקית, אך לשמור את המכסה מעל המנה כדי למנוע חיידקים ליפול פנימה. שנית, אתה הם אוסף ענק של אורגניזמים אנושיים, חיידקיים, פטרייתיים ואחרות ~ ~ למרות שאינך יכול לראות זאת, אתה מקיף ענן צפוף של חיידקים המתפזרים מגופך. במקום לשבת על פני העור שלך, המיקרו-ביומה שלך משתרעת לאוויר ~ ~ כל-כך, לעולם אל תניף את ידיך על צלחת הפטרי, או רכן מעל המנה הפתוחה להביט פנימה ולבש כפפות אם יש לך אותם;)

הגדר את מרחב העבודה הסמי-סטרילי שלך

בחר משטח עבודה שאינו נקבובי, נקי מפסולת וזבל. ריססו את האזור בעזרת תמיסת האלכוהול של 70% איזופרופיל ונגבו אותו במגבת נייר. הניחו את הלהבה במרכז אזור העבודה והדליקו אותה. תרצה לעבוד כמה שיותר קרוב ללהבה מכיוון שהוא יוצר שדה סטרילי קטן סביבו. הניחו את צלחות ה- MEA שלכם בצד אחד ואת דגימת הפטריות שלכם על משטח חיתוך סטרילי בצד השני. בדרך כלל אני משתמש בצלחת פטרי סטרילית כמשטח החיתוך הסטרילי שלי, כמו גם כמשענת כלים. שופכים קצת אלכוהול איזופרופיל לכוס קטנה - תוכלו להשתמש בזה לעיקור הלהב והפינצטה בזמן העבודה.

*¡~ לחסן ~!*

לפני שתעשה משהו, עקר את הלהב ואת הפינצטה שלך על ידי טבילתם לתוך האלך האיזופרופיל ואז החזק אותם מעט מעל הלהבה. לאחר עיקור, הניח אותם על משטח החיתוך הסטרילי שלך אם תניח אותם. השתמשו בפינצטה, החזיקו את גזע הפטרייה דומם וחתכו נתח מקצהו. קח את הנתח הזה וחתוך את כל הצדדים כך שתקבל קובייה קטנה של ליבת גזע הפטריות כשכל המשטחים החיצוניים יוסרו. זה עוזר להיפטר מכל החיידקים האחרים שחיים על הפטרייה כדי שלא יזהמו את התרבות שלכם. לאחר מכן טובלים את ליבת הגזע באיזופרופיל למשך כ -30 שניות, שולפים החוצה ומניחים להתייבש בתוך השדה הסטרילית של הלהבה (אל תשתמשו בלהבה כדי לייבש אותה, זה יהרוג את הפטרייה). להבה לעקר את הפינצטה שלך שוב בזמן שאתה מחכה ליבת הגזע להתייבש. לאחר מכן פשוט הרם את המכסה של אחת מצלחות ה- MEA שלך מספיק כדי להחליק את הפינצטה מהצד, והשתמש בפינצטה המעוקרת כדי למקם את ליבת הגזע במרכז הצלחת. אטמו את הצלחת עם parafilm, ובמהלך השבועות הקרובים, אתם אמורים לראות את התפטיר S. Commune מתיישב את הצלחת.

בדרך כלל אני מכין מספר צלחות כשעובד עם דגימות בר, כך שאם אכן יקבל זיהום, סביר יותר שתהיה לי תרבות נקייה אחת לפחות.